首先要為大家介紹下質(zhì)粒圖譜包含的四大要素
1、復(fù)制起點(diǎn)：控制著質(zhì)粒的復(fù)制，并決定了質(zhì)粒的宿主和拷貝數(shù)；
2、篩選標(biāo)記：多為抗性基因，以便加以檢測(cè)篩選；
3、多克隆位點(diǎn)：外源基因的插入位點(diǎn)；
4、其他元件：如轉(zhuǎn)錄調(diào)控元件、翻譯表達(dá)元件和蛋白標(biāo)簽等。
以下就用大家常用的pcDNA3.1(+)表達(dá)載體作為案例
第一步：了解質(zhì)粒圖譜中的復(fù)制起點(diǎn)
如上圖譜中的ori表示質(zhì)粒的復(fù)制起點(diǎn)。質(zhì)粒的復(fù)制起點(diǎn)決定了質(zhì)粒的宿主及質(zhì)粒的拷貝數(shù)相關(guān)。若圖譜上只有一個(gè)ori，表示質(zhì)粒是原核克隆及表達(dá)質(zhì)粒。而圖譜上有兩個(gè)ori，則表示該質(zhì)粒是穿梭質(zhì)粒，既可以在原核也可以在真核中復(fù)制。
第二步：了解質(zhì)粒圖譜中的篩選標(biāo)記
圖譜中的AmpR、KanR等表示質(zhì)粒載體中的篩選標(biāo)簽，多為抗生素抗性基因，方便后續(xù)通過抗生素篩選陽(yáng)性克隆。只存在單抗性的質(zhì)粒多為原核克隆載體和原核表達(dá)載體。而存在兩種或以上的抗性的多為穿梭質(zhì)粒。
第三步：了解質(zhì)粒圖譜中的多克隆位點(diǎn)
圖譜中的MCS區(qū)或者許多內(nèi)切酶集中的部分，就是質(zhì)粒的多克隆位點(diǎn)。多克隆位點(diǎn)為一系列限制性內(nèi)切酶酶切位點(diǎn)，是外源DNA的插入位點(diǎn)，一般可通過酶切后連接的方式將外源DNA插入質(zhì)粒。多克隆位點(diǎn)一般位于轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)和轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)之間。
第四步：了解質(zhì)粒圖譜中其它元件
質(zhì)粒載體中除復(fù)制起始位點(diǎn)、篩選標(biāo)記、多克隆位點(diǎn)外，還具有其他一些表達(dá)或調(diào)控元件，如轉(zhuǎn)錄調(diào)控元件、翻譯調(diào)控元件和融合表達(dá)標(biāo)簽蛋白等。比如：
蛋白純化標(biāo)簽蛋白：His-Tag，GST-tag等
蛋白檢測(cè)標(biāo)簽蛋白：Myc-Tag，F(xiàn)lag-Tag，HA-Taq等
熒光蛋白表達(dá)標(biāo)簽：GFP，mCherry等
