二、斜面接種法

該法主要用于單個菌落的純培養(yǎng)、保存菌種或觀察細菌的某些特性。

（1）左手平托兩支試管，拇指按住試管的底部。外側一支試管是斜面上長有菌苔的菌種試管，內側一支是待接的空白斜面，兩支試管的斜面同時向上。用右手將試管塞旋松，以便在接種時容易拔出。

（2）右手拿接種環(huán)（如握毛筆一樣），在火焰上先將環(huán)端燒紅滅菌，然后將有可能伸入試管的其余部位也過火滅菌．

（3）將兩支試管的上端并齊，靠近火焰，用右手小指和掌心將兩支試管的試管塞一并夾住拔出，試管塞仍夾在手中，然后讓試管口緩緩過火焰。注意不得將試管塞隨意丟于桌上受到沾污，試管口切勿燒得過燙以免炸裂。

（4）將已灼燒的接種環(huán)伸入外側的菌種試管內。先把接種環(huán)的先端觸及無菌苔的培養(yǎng)基上使其冷卻（如果操作迅速，此時接種環(huán)尚未完全冷卻）。再根據需要用接種環(huán)沾取一定量的菌苔，注意勿刮破培養(yǎng)基。將沾有菌苔的接種環(huán)迅速抽出試管，注意勿使接種環(huán)碰到管壁或管口上。

（5）迅速將沾有菌種的接種環(huán)伸入另一支待接斜面試管的底部，輕輕向上劃線（直線或曲線，根據需要確定），勿劃破培養(yǎng)基表面。

（6）接好種的斜面試管口再次過火焰，試管塞底部過火焰后立即塞入試管內。

（7）將沾有菌苔的接種環(huán)在火焰上燒紅滅菌。先在內焰中燒灼，使其干燥后，再在外焰中燒紅，以免菌苔驟熱，會使菌體爆濺，造成污染。

（8）放下環(huán)后，再將試管塞旋緊，在試管外面上方距試管口2～3cm處貼上標簽。

斜面接種方法及無菌操作過程如下具體操作過程見圖3。

三、穿刺接種法

用接種針經火焰滅菌，沾取少量菌種，垂直地穿入試管固體培養(yǎng)基中心至底部，然后將挑起菌落的接種針平行于管壁插入瓊脂斜面底部、沿著原接種線將針拔出、燒試管塞和試管口、塞上試管塞，再將接種針上殘留的菌體在火焰上燒掉。要做到手穩(wěn)、動作輕巧快速。見下圖4。（a:垂直接種法，b：水平接種法）

圖4